Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Регуляция функций в организме
Для регуляции физиологических процессов в соответствии с потребностями организма и изменениями окружающей среды существует два механизма: гуморальный и нервный. Гуморальная регуляция физиологических процессов осуществляется с помощью химических веществ, которые посту ...

Биология выдры. Морфологическое описание
Выдра - среднего размера, коротконогий зверь. Вес взрослых самцов может достигать десяти килограммов. Жизнь в воде сказывается на всем строении ее тела и облике. Длинное, гибкое туловище. Благодаря наличию плавательных перепонок между пальцами передних и задних конечн ...

Фосфолипазы
Фосфолипазы - ферменты класса гидролаз, катализирующие катаболизм глицерофосфолипидов. Различают фосфолипазы секреторные, входящие в состав панкреатического сока, и клеточные фосфолипазы. Клеточные фосфолипазы А1, А2, D, С различаются по специфичности к отщепляемой гр ...