Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка
Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).
Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.
Также смотрите:
Извлечение градиентов из центрифужных пробирок
После завершения центрифугирования и разделения частиц необходимо извлечь образовавшиеся зоны. Это делают несколькими способами, чаще всего методом вытеснения. Центрифужную пробирку прокалывают у основания и в нижнюю ее часть медленно вводят очень плотную среду, напри ...
Особенности поведения
Ондатра перемещается по водоёму по своему участку в связи с поиском пищи, а так как кормовая база достаточно обильна на этой речке, то длина этих перемещений колеблется в пределах 150 метров.
Весна- пора активного расселения ондатр. В это время их можно увидеть путеш ...
Химическая природа и свойства витамина D.
В чистом виде витамин D представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, нерастворимое в воде.
Эмпирическая формула С28Н44О. Химическая структура его установлена. Он близок к стеринам и получается в организме животных из 7-дегидрохолестерина, а в растениях - и ...