Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Органы, полости тела и нервная система земноводных
Особенности внутреннего строения. У земноводных в отличие от рыб развились слюнные железы. Зубы, если имеются, конической формы и способствуют удерживанию добычи. У многих хвостатых конец языка обращен назад и при ловле насекомых может выбрасываться далеко вперед. Жел ...

Охрана природы
В России разработана и введена в действие система водоохранных мероприятий с учетом интересов рыбного хозяйства, судоходства и водоснабжения. Органы рыбоохраны контролируют выполнение водопользователями мероприятий по охране и рациональному использованию водных ресур ...

Скорость проведения
Скорость проведения потенциала действия зависит от того, насколько быстро и насколько далеко впереди от активного участка происходит, благодаря распространению положительного заряда, деполяризация мембраны до порогового уровня. Это, в свою очередь, зависит от величины ...