Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка
Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).
Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.
Также смотрите:
Поясните смысл гипотезы Планка о дискретном
характере испускания света? Насколько были решены при этом противоречия в
теории теплового излучения?
Первоначально гипотеза Планка в ее наиболее смелой форме состояла в предположении, что вещество может поглощать энергию излучения только конечными порциями, пропорциональными частоте. Успех теории черного излучения подтвердил справедливость этой гипотезы. Но если эта ...
Суточная потребность в витамине К.
Взрослому человеку необходимо в день 10 мг. витамина К. ...
Роль обмена веществ и
энергии в жизни живых существ. Биологическое значение цикла Кребса
Обязательным условием существования любого организма является постоянный приток питательных веществ и постоянное выделение конечных продуктов химических реакций, происходящих в клетках организма.
Поступившие в организм в ходе питания органические вещества (или синтез ...