Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Методы лабораторной и инструментальной диагностики заболеваний органов мочеотделения
При восстановительном процессе в почках без лейкоцитурии для ее выявления используют так называемые провокационные тесты – преднизолоновый и пирогеналовый. Эти тесты основаны на том, что после введения в.в. 30 мг. преднизалона, или внутримышечно 10 МПД (миним. пироген ...

Экологическая реальность планеты Земля. Глобальные катастрофы и их роль в эволюции планеты Земля
В 1866 году Эрнестом Геккелем был предложен термин "экология" для обозначения отрасли биологического знания, рассматривающего вопросы взаимодействия организмов и окружающей среды. Так произошло "официальное" признание новой науки, потребность в ко ...

Сигнальная система организма
В первой сигнальной системе все формы поведения, включая способы и средства взаимного общения, базируются исключительно на непосредственном восприятии действительности и реакции на натуральные раздражители. Первая сигнальная система обеспечивает формы конкретно-чувств ...