Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Выводы
1. Обнаружено увеличение активности ангиотензинпревращающего фермента у онкологических больных прошедших химиотерапию по сравнению с периодом до начала лечения и контрольной группой. 2. Обнаружено увеличение активности карбоксипептидазы N у онкологических больных до ...

Биологическое действие витамина В12.
Биохимическая роль витамина В12 очень многогранна, но основная роль витамина В12 заключается в синтезе нуклеиновых групп при превращении гомоцистеина в метионин, а оксиэтиламина в холин, являющихся липотропными факторами. Витамин В12 принимает участие и в реакции а ...

Обратная транскриптаза
Обратная транскриптаза используется для транскрипции м-РНК в комплементарную цепь ДНК. При изучении ретровирусов, геном которых представлен молекулами одноцепочечной РНК, было обнаружено, что в процессе внутриклеточного развития ретровирус проходит стадию интеграции с ...