Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка

Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) мощностью 150 Вт при 20 Гц (3×1 мин с минутными перерывами) при охлаждении. Неразрушенные клетки отделяли центрифугированием при 4oС (14000 об/мин в течение 30 мин).

Концентрацию белка определяли модифицированным методом Лоури (Schacterle, Pollack, 1973) с использованием БСА в качестве стандарта.


Также смотрите:

Виды пингвинов
Несмотря на исключительную популярность пингвинов, большая часть их видов моряками не различается. Но справедливости ради следует заметить, что это очень даже непростое дело. Самый крупный пингвин - императорский, или Форстера. Он обитает только на побережье Антаркти ...

Вкусовые ощущения
Вкусовые ощущения, как и обонятельные, обусловлены химическими свойствами вещей. Из комплекса ощущений, вызываемых вкусовыми веществами, можно выделить четыре основных чувства – соленое, кислое, сладкое и горькое. К вкусовым ощущениям обычно присоединяются ощущения ...

Антидарвинизм
Вся западная цивилизация до сих пор действует в соответствии с принципом Дарвина, оправдывая им самые низменные мотивы. Если бы предположения Дарвина (только предположения, не удостоверенные фактами, чтобы считаться научной теорией) были верны, то и в настоящее время ...