BioFine

Выделение возбудителя является более эффективным, чем бактериоскопия, и позволяет выявить 20 - 100 и более микобактерий в 1 мл исследуемого материала, а также определить их устойчивость к лекарственным препаратам, вирулентность, типовую принадлежность и другие важные характеристики. Недостатком метода является длительность исследования от 2-х до 12-ти недель [1].

При культивировании микобактерий большое значение имеет гомогенизация, флотация и деконтаминация материала, проводимые с целью повышения концентрации микобактерий и освобождения материала от посторонней микрофлоры и других частиц. Для обработки материала перед его посевом используют различные вещества, которые обеспечивают его гомогенизацию и концентрацию. При этом они должны обеспечивать сохранение жизнеспособности возбудителей туберкулеза и угнетать рост сопутствующей микрофлоры. Предварительную обработку материала, помещенного в стерильную склянку с бусами, производят кислотами, щелочами, ферментами или детергентами. Наиболее широко используют обработку 10% -м фосфатом натрия, реже применяют 1% -й N-ацетил-L-цистеингидроксид (они лучше обеспечивают жизнеспособность возбудителей туберкулеза). К исследуемому материалу добавляют равный объем фосфата и инкубируют смесь при 37°С в течение 24 ч, затем нейтрализуют смесь соляной кислотой и центрифугируют. Осадок засевают на элективные питательные среды. Одновременно делают посев необработанного материала на питательные среды для выявления L-форм возбудителей туберкулеза и других возможных возбудителей инфекции. При отсутствии контаминации (асептически взятый ликвор) можно делать посев необработанного материала на специальные среды для выделения микобактерий. В качестве плотных сред для выделения используют яичную среду Левенштейна-Йенсена, среду Финна II и другие [2].

Модифицированная среда Левенштейна-Йенсена.

Она рекомендована ВОЗ в качестве стандартной среды для первичного выращивания микобактерий туберкулеза и определения их устойчивости к химиопрепаратам. Готовят отдельно 3 составляющих среды:

Минеральный солевой раствор: калия дигидрофосфат (2,4 г), магния сульфат (0,24 г), магния цитрат (0,6 г), аспарагин (3,6 г), глицерин (12 мл), дистиллированная вода (600 мл).

Раствор стерилизуют автоклавированием при 121°С 30 мин.

2% -й раствор малахитового зеленого (2,0 г малахитового зеленого + 100 мл стерильной дистиллированной воды).

Гомогенизат целых яиц (используют свежие куриные яйца). Все 3 ингредиента асептически смешивают в следующей пропорции: минеральный солевой раствор (600 мл), раствор малахитового зеленого (20 мл), яичный гомогенизат (1000 мл).

Готовую среду разливают в стерильные пробирки или флакончики и проводят коагуляцию при 80 - 85°С в течение 45 мин.

Среда Финна - II

Готовят отдельно три составляющих среды:

Питательная основа: магния сульфат (7Н20) (0,5 г), натрия цитрат (1,0 г),

железа аммонийного сульфат (0,05 г), калия дигидрофосфат (20,0 г), аммония дигидроцитрат (5,0 г), натрия глютамат (10,0 г), глицерин (20 мл), дистиллированная вода (1000 мл).

Раствор стерилизуют автоклавированием при 121°С 20 мин.2% -й раствор малахитового зеленого. Гомогенизат целых яиц (используют свежие куриные яйца - 40 шт.). Все 3 ингредиента асептически смешивают в следующей пропорции: минеральный солевой раствор (1000 мл), раствор малахитового зеленого (33 мл), яичный гомогенизат (1000 мл).

Готовую среду разливают в стерильные пробирки или флакончики по 4 - 5 мл и проводят коагуляцию при 85°С в течение 30 мин, после чего готовые скошенные среды выдерживают до остывания или до следующих суток при комнатной температуре в свертывателе. Готовые среды хранят в полиэтиленовых пакетах в холодильнике не более одного месяца. За рубежом для культивирования микобактерий в качестве неселективных широко используют жидкие и плотные среды Мидлбрука. В их состав входит глицерин, неорганические вещества, витамины, глюкоза, олеиновая кислота (используется в метаболизме микобактерий), альбумин (защищает микобактерии от действия токсических веществ и является источником протеина), каталаза (защищает от действия токсичных перекисей) [1].

Также смотрите:

Самоорганизация
Главной заслугой синергетики считается открытие ею процессов самоорганизации и кооперации в природе - это шаг вперед в познании мира. И хотя авторы синергетики вначале подметили явления самоорганизации только для отдельных физических и химических процессов, но в дальн ...

Применение витамина В12.
В лечебной практике витамин В12 используется главным образом при резком малокровии, а также при заболеваниях печени, при полиневритах. Выпускается витамин В12 в ампулах с различной дозировкой от 100 до 1000 a в 1 мл. Вводится он или подкожно, или внутревенно, или в ...

Снаряжаем экспедицию
Прежде чем приступить к сбору растений, нужно приготовить для этого нехитрые, но очень полезные приспособления. Это, прежде всего, гербарная папка. Сделать ее совсем несложно. Вам понадобятся два листа картона формата А3. Их складывают вместе и проделывают в углах отв ...