BioFine

Для исследования физиолого-биохимических свойств микроорганизмов использовались дифференцировочные пластины. Пластина представляет собой панель с 20 конусообразными лунками, на дно которых нанесены соответствующие субстраты с индикаторами, стабилизированные поливиниловым спиртом. Панель закрывается крышкой. Панель и крышка изготовлены из полистирола. Субстрат с индикаторами вносят в лунки в жидком виде, затем высушивают и стерилизуют.

Специфическое действие препарата заключается в возможности дифференцировать бактерии на основе определения ферментативных систем по их действию на соответствующие субстраты.

Биохимические дифференцировочные пластины предназначены для определения ферментативной активности бактерий, выделяемых в ходе микробиологических исследований. Это может помочь при дальнейшей идентификации до рода и возможно вида.

Подготовка исследуемых образцов

Перед проведением исследования выделенные культуры подлежат изучению на чистоту.

Идентификацию культур, непосредственно из нативного материала, производят со скошенного мясо-пептонного агара (МПА). Используют культуры выращенных в течение 18–24 часов при температуре при температуре 37 оС, без предварительного подращивания их на МПБ (мясо-пептонном бульоне).

Если выделенная культура микроорганизма находилась какое-либо время на хранении при комнатной температуре или в холодильнике, производят предварительный посев ее на МПБ на 2–4 часа при температуре 37 оС, затеи осуществляют пересев культуры на скошенный МПА. Посевы инкубируют в течение 18–24 часов при температуре 37 оС.

Культуру с МПА используют для приготовления суспензии в стерильной 1% пептонной воде рH 7,2–7,4 и доводят мутность суспензии до 10 единиц по отраслевому стандартному образцу мутности бактериальных взвесей, стеклянному. При отсутствии отраслевого стандартного образца в 4,0 мл стерильной 1% пептонной воды вносят 2–3 петли исследуемой культуры до образования видимой мутности.

Проведение исследования

1. Вскрывают упаковку пластин.

2. Регистрируют на крышке панели номер засеваемого штамма.

3. Открывают крышку и располагают панель на столе.

4. Добавляют пипеткой по 0,15 мл микробной суспензии в стерильной 1% пептонной воде во все лунки панели, кроме 17,18,19 которые оставляют свободными.

5. Для создания анаэробных условий добавляют 1–2 капли стерильного вазелинового масла в лунки для определения аргининдегидрогеназы и уреазы (№№11,20).

6. Закрывают крышку панели.

7. Выдерживают пластины в течение 18–24 часов при температуре 37 оС.

Учет результатов

Учет результатов производят визуально в соответствии с цветовым указателем, приложенным к пластинам, 18–24 часа инкубации при 37 оС.

После окончания инкубации открывают крышку панели и в лунки для выявления ацетилметилкарбинола (№10) добавляют 1 каплю 6%-го раствора альфа нафтола и затем 1 каплю 40% раствора гидроокиси калия; для определения фосфатазы (№8) – 1 каплю 20% раствора гидроокиси натрия; для выявления нитратредуктазы (№9) добавляют 1 каплю реактива Грисса. Реакции учитывают немедленно в лунках №8,9, выявление ацетилметилкарбинола (№10) осуществляют через 15–20 минут после закапывания реактивов.

Также смотрите:

Земля
В Масштабах Вселенной наша планета – микроскопическая частица, вращающаяся вокруг рядовой звезды в одной из бесчисленных галактик. С точки зрения космологии Земля – довольно стабильная планета. Её сложность и размеры как космического объекта со временем не нарастают. ...

Метод определения активности ангиотензинпревращающего фермента
Активность АПФ определяли в сыворотке крови нингидриновым методом по образованию гли-арг из кбз-гли-гли-арг при рН 8,2 как активность, ингибируемую каптоприлом. Препарат фермента (40 мкл) смешивали с 20 мкл 35 мкМ каптоприла в 100 мМ Трис-НСl буфере, рН 8,2, или 20 мк ...

Бокальчатая ржавчина
Возбудитель – базидиальный гриб Puccinia ribis – caricis kleb из порядка Uredinales. В конце мая – начале июля на молодых листьях, цветках и побегах, на зеленой завязи, ягодах, черенках появляются ярко-желтые выпуклые крупные пятна это стробы гриба Puccinia ribis – c ...