Подвижная и неподвижная фазы
Переходя к рассмотрению вариантов истинной хроматографии, полезно ввести понятия «подвижной» и «неподвижной» фаз. Имеется в виду движение фракционируемых молекул вниз по колонке. Подвижную фазу, естественно, составляют молекулы, находящиеся вне гранул. Они движутся вместе с током элюента. Неподвижную фазу — молекулы, находящиеся внутри гранул. Такое разделение имело место и при гель-фильтрации. Там неподвижные в указанном смысле молекулы были таковыми в силу их растворения в неподвижной водной среде, заполнявшей гранулы. Конечно, и в этой среде они совершали броуновское движение, но это не подвигало их к выходу из колонки. С материалом самих гранул они если и взаимодействовали, то чисто механически — наталкиваясь на нити полимера, образующего гранулы.
В случае ионообменной хроматографии, наоборот, неподвижную фазу, в основном, составляют молекулы определенным образом связанные с материалом гранул («сорбированные» на нем). Пористость последних в этом случае выбирают так, чтобы фракционируемые молекулы могли бы практически беспрепятственно проникать в гранулы, заполняя весь их внутренний объем.
Само название ионообменная хроматография указывает на то, что связь молекул с гранулами должна быть ионная. То есть определяться кулоновскими силами притяжения между ионами противоположных знаков, закрепленными на нитях гранул и существующими на поверхности молекул. Слова «закрепленные» и «существующие» наводят на мысль о раз и навсегда фиксированной ситуации. Между тем, гибкость и эффективность метода ионообменной хроматографии опирается как раз на возможность управления этой ситуацией, а вместе с ней и силой связи молекул фракционируемого вещества с матрицей гранул — характером сорбции этих молекул.
Также смотрите:
Получение бесклеточных экстрактов и определение концентрации белка
Клетки в экспоненциальной фазе роста центрифугировали (30 мин при 6000 об/мин), дважды отмывали в буфере А (100 мМ трис-НCl, рН 8.0, содержащий 2.5 мМ MgCl2 и 1.5% KCl) и ресуспендировали в том же буфере. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе MSE (Англия) ...
Теория возникновения жизни (по Опарину)
В настоящее время наиболее широкое признание получила гипотеза о происхождении жизни на Земле, разработанная советским ученым академиком А. И. Опариным. Эта гипотеза исходит из предположения о постепенном возникновении жизни на Земле из неорганических веществ путем дл ...
Закон независимого комбинирования (наследования)
признаков (третий закон Менделя)
Этот закон говорит о том, что каждая пара альтернативных признаков ведет себя в ряду поколений независимо друг от друга, в результате чего среди потомков первого поколения (т.е. в поколении F2) в определенном соотношении появляются особи с новыми (по сравнению с родит ...