Хроматографическое фракционирование белковСтраница 2
Молекула белка в результате электростатической связи одного из своих зарядов с неподвижным ионом матрицы закрепляется в одной точке и начинает, как уже было сказано, поворачиваться относительно этой точки. Может оказаться, что при одном из таких поворотов второй заряд на ее поверхности окажется вблизи заряда противоположного знака на той же или другой, близко проходящей нити обменника. Возникает вторая электростатическая связь молекулы белка с матрицей. Такое событие качественно меняет ситуацию. Закрепление белка на обменнике оказывается не вдвое, а на порядок величины более прочным. Это обусловлено независимостью двух связей, что позволяет им как бы «страховать» друг друга. Представим себе, что под тепловыми ударами молекул воды одна из связей разорвалась. Удерживаемая второй связью молекула белка не сможет далеко отойти от места первоначального контакта. Она будет поворачиваться около этой второй связи, и весьма вероятно, что в ходе таких поворотов первая связь восстановится. В другой момент две эти связи могут поменяться ролями.
Чтобы вклиниться в это явление «взаимной страховки», т. е. чтобы блокировать восстановление первой разорванной связи до того момецта, когда разорвется и вторая связь, потребуется значительное увеличение концентрации контрионов соли в элюенте. Если же молекуле белка удастся закрепиться в трех точках, то снять ее окажется очень трудно или даже невозможно (произойдет необратимая сорбция белка на ионообменнике).
В силу сказанного, для успешного фракционирования смеси белков следует до внесения препарата на колонку уравновесить жидкую фазу обменника раствором соли такой концентрации, которая гарантировала бы образование не более, чем двухточечных связей для всех белков смеси с матрицей.
Также смотрите:
Среды для выделения и идентификации микобактерий
Выделение возбудителя является более эффективным, чем бактериоскопия, и позволяет выявить 20 - 100 и более микобактерий в 1 мл исследуемого материала, а также определить их устойчивость к лекарственным препаратам, вирулентность, типовую принадлежность и другие важные ...
Химическая природа и физико-химические свойства.
Витамин Е или токоферол, представляет собой маслянистую жидкость желтоватого цвета. Каррер в 1938 г. получил α - токоферол синтетически из триметилгидрохинона и фенилбромида.
В настоящее время получено 7 различных токоферолов, незначительно отличающихся один от ...
Биологическое действие витамина D.
Исследованиями, проведенными в 1951 г., было установлено, что витамин D способствует усвоению кальция в кишечнике и повышению отложению кальция в костях. Предполагают, чтолучшая усвояемость кальция при введении витамина D происходит вследствии соединения кальция с ви ...