Изопикническое центрифугирование

Биология » Центрифугирование » Изопикническое центрифугирование

Изопикническое центрифугирование проводят как в градиенте плотности, так и обычным путем. Если центрифугирование проводится не в градиенте плотности, препарат сначала центрифугируют так, чтобы осели частицы, молекулярный вес которых больше, чем у исследуемых частиц. Эти тяжелые частицы отбрасывают, и образец суспендируют в среде, плотность которой такая же, как и у фракции, которую хотят выделить, а затем центрифугируют до тех пор, пока исследуемые частицы не осядут на дно пробирки, а частицы меньшей плотности не всплывут на поверхность жидкости

Другой способ заключается в наслаивании образца на поверхность раствора с непрерывным градиентом плотности, охватывающим диапазон плотностей всех компонентов смеси. Центрифугирование проводят до тех пор, пока плавучая плотность частиц не сравняется с плотностью соответствующих зон, т. е. пока не произойдет разделение частиц по зонам. Метод получил название зонально-изопикнического, или резонального центрифугирования, так как основным моментом здесь является плавучая плотность, а не размеры или форма частиц. На величину плотности, при которой частицы образуют изопикнические полосы, влияет природа среды суспендирования; частицы могут быть проницаемыми для одних соединений, находящихся в растворе, и непроницаемыми для других или же присоединять молекулы раствора. При использовании зонального ротора митохондрии, лизосомы, пероксисомы и микросомы концентрируются в полосах с 42%, 47%, 47% и 27%-ной сахарозой, соответствующих плотности 1,18, 1,21, 1,21 и 1,10 г-см-3 соответственно. Плотность субклеточных органелл зависит также и от избирательного поглощения ими определенных соединений. Введение крысам не вызывающего гемолиз детергента тритона WR-1339 приводит ^увеличению размеров и уменьшению плотности лизосом печени; плотность митохондрий и пероксисом остается без изменений. Несмотря на то что седиментационные свойства лизосом при этом, как правило, не меняются, их равновесная плотность в градиенте сахарозы понижается с 1,21 до 1,1, что приводит к соответствующему разделению лизосомально-пероксисомальной фракции. Эта особенность используется при количественном разделении лизосом, митохондрий и пероксисом, основанном на удалении из гомогенной среды всех частиц с большей, чем у микросом, плотностью и последующем изопикническом центрифугировании выпавших в осадок тяжелых частиц.


Также смотрите:

Теория, которую надо знать.
По типу кожи все люди делятся на пять категорий: v Первый — альбиносы, кожа у которых очень светлая. Загар людям с таким типом кожи противопоказан, солнечные лучи способны только вызвать у них ожог. v Второй — светлокожие блондины. Они могут добиться едва заметного ...

Коварство солнечных лучей
Ласковые солнечные лучи на самом деле очень коварны. Они могут привести к так называемому фотостарению (непривычная к жаркому климату кожа начинает очень быстро покрываться пигментными пятнами и морщинами). Но этих проблем можно легко избежать, если запастись специали ...

Применение витамина А и каротинов в лечебной практике.
Основным лечебным препаратом, содержащим витамин А, является рыбий жир, особенно жир, полученный из печени рыб тресковых пород. Витамин А применяется в виде мази при лечении ран и ожогов кожи, так как благодаря каротинам и витамину А оказывает и обезболивающее действи ...