Методы исследования. Метод определения активности карбоксипептидазы N
Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [61].
Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO4, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37oC, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37oC и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.
Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H2O.
Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.
Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.
Также смотрите:
Физико-химическая и гидрологическая характеристика источника водоснабжения
Дон — река в Европейской части России. По площади водосбора, равной 422 тыс. км² уступает только Волге, Днепру и Каме. Длина реки — 1870 км. Название происходит от скифо-сарматского dānu, осетинского "дон" вода, река.
Исток Дона расположен в север ...
Биологическая характеристика объектов разведения Русский осетр (Acipenser
guldenstaedtii)
Тело удлиненной, веретеновидной формы. Рыло короткое, тупое. Усики располагаются ближе к концу рыла, чем ко рту. Нижняя губа прервана. Тело между рядами жучек покрыто звездчатыми пластинками, иногда между жучками разбросаны мелкие костные пластинки. Окраска сильно вар ...
Возможности трансформации путей развития сложных
систем
Синергетика говорит о том, что изменить поле путей развития сложной структуры, трансформировать спектр структур-аттракторов можно в том случае, если перестроить саму среду. А перестроить среду значит изменить поведение элементов или подсистем этой среды в каждой локал ...