Методы исследования. Метод определения активности карбоксипептидазы N
Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [61].
Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO4, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37oC, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37oC и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.
Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H2O.
Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.
Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.
Также смотрите:
Организация рейдовых выездов и проверок
По организации контроля в охотничьих угодьях рейды подразделяются на: текущие и экстренные.
1. Текущий: организует рейд по борьбе с браконьерством начальник отдела Мысак А.П., значительная роль в организации рейдов лежит на нем, он вызывает инспекторов и указывает им ...
Ландшафтная экология
При рассмотрении этого вопроса, следует обратиться к истокам возникновения экологии и объединения её с географией. Зародившись в недрах биологии, биологическая экология (биоэкология) сформировалась как наука о закономерностях взаимодействия биологических систем с окру ...
Список сокращений
ask – ген, кодирующий аспартаткиназу (Ask)
ectA – ген, кодирующий ДАБ-ацетилтрансферазу (EctA)
ectB – ген, кодирующий ДАБ-аминотрансферазу (EctB)
ectC – ген, кодирующий эктоинсинтазу (EctC)
ectD – ген, кодирующий эктоингидроксилазу (EctD)
His – гистидин
Ni2+-NTA ...
