BioFine

Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [61].

Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO4, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37oC, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37oC и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.

Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H2O.

Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.

Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.

Также смотрите:

Собственные исследования. Материал и методы
Наши исследования проводились с июля 2006 по февраль 2008 года. Основной их объем приходился на время прохождения преддипломной практики. Основные исследования проводились на территории Ромненского района. При проведении исследований мы проанализировали данные по чи ...

Основные болезни смородины черной. Септориоз
Возбудитель гриб Mycosphaerella ribis lind относится к классу аскомицеты, порядку Dothideales к конидиальной стадии относится несовершенный гриб Septoria ribis Deseu, порядок Sphaeropsidales. В середине мая на листьях смородины появляются мелкие, сначала бурые, затем ...

Зрительные ощущения.
Роль зрительных ощущений в познании мира особенно велика. Они доставляют человеку исключительно богатые и тонкие дифференцированные данные, притом огромного диапазона. Зрение дает нам наиболее совершенное, подлинное восприятие предметов. Зрение дает нам отражение всех ...