Методы исследования. Метод определения активности карбоксипептидазы N
Активность КПN определяли в сыворотке крови нингидриновым методом [61].
Опытные пробы содержали 20 мкл 3,5 мМ раствора CoSO4, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Контрольные пробы содержали 20 мкл 100 мМ Трис-HCl, pH 7,6 и 40 мкл препарата фермента. Пробы преинкубировали 8 мин при 37oC, реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 10 мкл гиппурил-арг, приготовленного на 100 мМ Трис-HCl буфере, pH 7,6 (конечная концентрация в пробе 5 мкМ). Реакцию проводили 120 мин при 37oC и останавливали прибавлением 30 мкл 10 % трихлоруксусной кислоты.
Пробы центрифугировали 20 мин при 4000 об/мин, отбирали 50 мкл надосадочной жидкости, приливали 1 мл нингидринового реактива. Далее пробы встряхивали, выдерживали 12 мин на кипящей водяной бане и измеряли оптическую плотность на КФК-2 при 595 нм против H2O.
Активность КПN определяли как разность оптической плотности опытных и контрольных проб и выражали в нмоль аргинина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка.
Концентрацию белка в пробах определяли биуретовым методом.
Также смотрите:
Суточная потребность в витамине В2.
Суточная потребность взрослого человека в витамине В2 составляет 2 мг. Лечебные дозы от 5 до 10 мг. ...
Анализ уровня экономической эффективности работы Магдагачинского
охотнадзора
Экономическая эффективность деятельности отдела – это экономическая категория, характеризующая в конечном итоге сопоставление полученного результата с задействованными при этом ресурсами и затратами на производственную деятельность.
Для овладения методикой измерения ...
Борьба за корм
Оценивая кормовую базу любого вида животного, необходимо учитывать не только общий запас кормов, их состав и качество, но и доступность, а если речь идет о питании копытных зверей - то и концентрацию их на пастбищах. Последнее особенно важно, так как если насыщенность ...