Метод определения содержания белка

Содержание общего белка определяли биуретовым методом. Принцип метода основан на том, что ионы меди в щелочной среде взаимодействуют с пептидными связями белков сыворотки крови с образованием комплекса красного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации общего белка.

Опытные пробы содержали 50 мкл сыворотки крови и 2,5 мл рабочего раствора биуретового реагента (концентрат биуретового реагента развести дистиллированной водой в соотношении 1:19). Контрольные пробы содержали 50 мкл дистиллированной воды и 2,5 мл рабочего раствора биуретового реагента. В калибровочную пробу добавляли 50 мкл калибровочного раствора общего белка (раствор бычьего сывороточного альбумина с концентрацией 60 г/л с добавлением хлористого натрия 9 г/л и азида натрия 1 г/л).

Содержимое пробирок тщательно перемешивали, избегая образования пены, инкубировали при комнатной температуре (+ 18 - 25С) в течение 30 минут, после чего измеряли величину оптической плотности калибровочной и опытных проб против контрольной пробы при длине волны 540 нм.

Концентрацию общего белка рассчитывали, как отношение оптической плотности опытной пробы к оптической плотности калибровочной пробы умноженная на концентрацию общего белка в калибровочном растворе (60 г/л).


Также смотрите:

Описание технологического процесса работы рыбоводного предприятия. Заготовка и получение зрелых производителей. Заготовка и получение зрелых производителей русского осетра
Получение зрелых производителей, у которых икра и сперма пригодны для оплодотворения - важнейший элемент работы по искусственному разведению осетровых. В Азово-Донском районе из-за слабого захода осетровых в реки, их производителей отлавливают ставными неводами в пред ...

Экологические особенности
К сезонным явлениям в жизни птиц надо отнести следующее: весенний перелет, кладка яиц – гнездование, осенний перелет. У некоторых видов, в их внутренней жизни, наблюдаются такие явления, как токование, что имеет связь с размножением, линька – как обновление перьевого ...

Конструкция роторов. Угловые роторы и роторы с подвесными стаканами
Роторы препаративных центрифуг обычно бывают двух типов — угловые и с подвесными стаканами. Угловыми они называются потому, что помещаемые в них центрифужные пробирки все время находятся под определенным углом к оси вращения. В роторах с подвесными стаканами пробирки ...