Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий
В работе использовали чистую культуру аэробной метилотрофной бактерии Methylarcula marina из коллекции лаборатории метилотрофии ИБФМ РАН. Methylarcula marina выращивали на среде “K” (табл. 2). Среду и раствор микроэлементов стерилизовали при 1 атм, 30 мин. Непосредственно перед засевом в качестве источника углерода вносили метиламин в конечной концентрации 1%. Культивирование проводили в колбах объёмом 750 мл, содержащих 200 мл среды. Инокулят добавляли в среду в соотношении 1:10 и встряхивали на роторной качалке (140 об/мин) при 26 °C.
Escherichia coli XL1-Blue, BL21(DE3) или S17-1 (штммы E. coli любезно предоставлены к.б.н. Ивашиной Т.В. ИБФМ РАН) выращивали при 37oС на жидкой или агаризованной (1.5% агара “Difco”) средах “LB” (табл. 2) с разными концентрациями соли (0-5% NaCl) с добавлением при необходимости селективных антибиотиков: канамицина (Km) - 50 мкг/мл, ампициллина (Amp) - 100 мкг/мл или хлорамфеникола (Cm) - 25 мкг/мл.
Таблица 2. Питательные среды, использованные в работе.
|
Компонент среды |
Концентрация | |
|
“К” |
КН2РО4 (NH4)2SO4 MgSO4×7H2O FeSO4×7H2O NaCl рН доводили до 7.4 Агар* |
2.0 г/л 2.0 г/л 0.025 г/л 0.002 г/л 0.5 г/л 2% |
|
“LB” |
Бакто-триптон Дрожжевой экстракт NaCl КСl MgCl2×6H2O МgSO4×7H2O Глюкоза |
20 г/л 5 г/л 0.584 г/л 0.186 г/л 2.03 г/л 2.463 г/л 3.6 г/л |
Также смотрите:
Что такое окислительное фосфорелирование? Указать участки сопряжения
окисления и фосфорелирования в цепях переноса электронов
Ответ.
Окислительное фосфорелирование - это синтез АТФ из аденозиндифосфата и неорг. фосфата, осуществляющийся в живых клетках, благодаря энергии, выделяющейся при окислении орг. в-в в процессе клеточного дыхания. В общем виде О.ф. и его место в обмене в-в можно пред ...
Идентификация агрина
Для идентификации сигнала, связанного с базальной мембраной и инициирующего постсннаптическую дифференцировку, МакМахан и его коллеги использовали морского ската Torpedo califomica. Из электрических органов этого животного, родственных скелетной мышце, они приготовили ...
Роль и функции кожи в жизни человека
Доклад Роль и функции кожи в жизни человека
Строение кожи очень сложно. Кожа состоит из трех слоев: эпидермиса, собственно кожи и подкожной жировой клетчатки. Каждый из них, в свою очередь, состоит из нескольких слоев (см. схему).
Эпидермис имеет вид узко ...