Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий

В работе использовали чистую культуру аэробной метилотрофной бактерии Methylarcula marina из коллекции лаборатории метилотрофии ИБФМ РАН. Methylarcula marina выращивали на среде “K” (табл. 2). Среду и раствор микроэлементов стерилизовали при 1 атм, 30 мин. Непосредственно перед засевом в качестве источника углерода вносили метиламин в конечной концентрации 1%. Культивирование проводили в колбах объёмом 750 мл, содержащих 200 мл среды. Инокулят добавляли в среду в соотношении 1:10 и встряхивали на роторной качалке (140 об/мин) при 26 °C.

Escherichia coli XL1-Blue, BL21(DE3) или S17-1 (штммы E. coli любезно предоставлены к.б.н. Ивашиной Т.В. ИБФМ РАН) выращивали при 37oС на жидкой или агаризованной (1.5% агара “Difco”) средах “LB” (табл. 2) с разными концентрациями соли (0-5% NaCl) с добавлением при необходимости селективных антибиотиков: канамицина (Km) - 50 мкг/мл, ампициллина (Amp) - 100 мкг/мл или хлорамфеникола (Cm) - 25 мкг/мл.

Таблица 2. Питательные среды, использованные в работе.

Компонент среды

Концентрация

“К”

КН2РО4

(NH4)2SO4

MgSO4×7H2O

FeSO4×7H2O

NaCl

рН доводили до 7.4

Агар*

2.0 г/л

2.0 г/л

0.025 г/л

0.002 г/л

0.5 г/л

2%

“LB”

Бакто-триптон

Дрожжевой экстракт

NaCl

КСl

MgCl2×6H2O

МgSO4×7H2O

Глюкоза

20 г/л

5 г/л

0.584 г/л

0.186 г/л

2.03 г/л

2.463 г/л

3.6 г/л


Также смотрите:

Методика учётов
Учёты ондатры могут быть сплошными или выборочными. Более точные данные получают при сплошных учётах на всех водоёмах охотничьего хозяйства или обследуемого участка. Выборочный учёт ондатры проводится путём закладки пробных площадок размером 100-200 га в таком количес ...

Пути развития сложных систем
В основе синергетической методологии лежит представление о спектре путей эволюции сложных систем, поле путей развития. Это означает неоднозначность будущего, существование моментов неустойчивости, связанных с выбором путей дальнейшего развития, а особую роль человека ...

Иммунная система
Конечно же, мы не будем пытаться глубоко проникнуть в обширную область медицинской иммунологии. Коснемся только тех возможностей, которые использование иммунохимического подхода предоставляет для исследования биополимеров. Однако для того, чтобы представить себе с че ...