Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий

Биология » Идентификация генов биосинтеза эктоина у метилотрофной бактерии Methylarcula marina » Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий

В работе использовали чистую культуру аэробной метилотрофной бактерии Methylarcula marina из коллекции лаборатории метилотрофии ИБФМ РАН. Methylarcula marina выращивали на среде “K” (табл. 2). Среду и раствор микроэлементов стерилизовали при 1 атм, 30 мин. Непосредственно перед засевом в качестве источника углерода вносили метиламин в конечной концентрации 1%. Культивирование проводили в колбах объёмом 750 мл, содержащих 200 мл среды. Инокулят добавляли в среду в соотношении 1:10 и встряхивали на роторной качалке (140 об/мин) при 26 °C.

Escherichia coli XL1-Blue, BL21(DE3) или S17-1 (штммы E. coli любезно предоставлены к.б.н. Ивашиной Т.В. ИБФМ РАН) выращивали при 37oС на жидкой или агаризованной (1.5% агара “Difco”) средах “LB” (табл. 2) с разными концентрациями соли (0-5% NaCl) с добавлением при необходимости селективных антибиотиков: канамицина (Km) - 50 мкг/мл, ампициллина (Amp) - 100 мкг/мл или хлорамфеникола (Cm) - 25 мкг/мл.

Таблица 2. Питательные среды, использованные в работе.

Компонент среды

Концентрация

“К”

КН2РО4

(NH4)2SO4

MgSO4×7H2O

FeSO4×7H2O

NaCl

рН доводили до 7.4

Агар*

2.0 г/л

2.0 г/л

0.025 г/л

0.002 г/л

0.5 г/л

2%

“LB”

Бакто-триптон

Дрожжевой экстракт

NaCl

КСl

MgCl2×6H2O

МgSO4×7H2O

Глюкоза

20 г/л

5 г/л

0.584 г/л

0.186 г/л

2.03 г/л

2.463 г/л

3.6 г/л


Также смотрите:

Теория творения (Креационизм)
Креационизм (от англ. creation — создание) — философско-методологическая концепция, в рамках которой основные формы органического мира (жизнь), человечество, планета Земля, а также мир в целом, рассматриваются как намеренно созданные неким сверхсуществом или божеством ...

Методы определения активности КФК
Унифицированным методом определения активности креатинфосфокиназы служит метод с использованием в качестве субстрата реакции креатина. Активность фермента пропорциональна количеству неорганического фосфора, образующегося в результате кислотного гидролиза продукта креа ...

Корневые гнили
Корневые гнили пшеницы, ржи, ячменя, овса относятся к числу внешне малозаметных, но весьма вредоносных заболеваний хлебных злаков. Возбудителями корневых гнилей яв­ляются широко распространенные виды грибов, живущие на обо­лочках и внутри семян, в почве и на остатках ...