Экспериментальная часть. Материалы и методы исследования. Культивирование бактерий
В работе использовали чистую культуру аэробной метилотрофной бактерии Methylarcula marina из коллекции лаборатории метилотрофии ИБФМ РАН. Methylarcula marina выращивали на среде “K” (табл. 2). Среду и раствор микроэлементов стерилизовали при 1 атм, 30 мин. Непосредственно перед засевом в качестве источника углерода вносили метиламин в конечной концентрации 1%. Культивирование проводили в колбах объёмом 750 мл, содержащих 200 мл среды. Инокулят добавляли в среду в соотношении 1:10 и встряхивали на роторной качалке (140 об/мин) при 26 °C.
Escherichia coli XL1-Blue, BL21(DE3) или S17-1 (штммы E. coli любезно предоставлены к.б.н. Ивашиной Т.В. ИБФМ РАН) выращивали при 37oС на жидкой или агаризованной (1.5% агара “Difco”) средах “LB” (табл. 2) с разными концентрациями соли (0-5% NaCl) с добавлением при необходимости селективных антибиотиков: канамицина (Km) - 50 мкг/мл, ампициллина (Amp) - 100 мкг/мл или хлорамфеникола (Cm) - 25 мкг/мл.
Таблица 2. Питательные среды, использованные в работе.
|
Компонент среды |
Концентрация | |
|
“К” |
КН2РО4 (NH4)2SO4 MgSO4×7H2O FeSO4×7H2O NaCl рН доводили до 7.4 Агар* |
2.0 г/л 2.0 г/л 0.025 г/л 0.002 г/л 0.5 г/л 2% |
|
“LB” |
Бакто-триптон Дрожжевой экстракт NaCl КСl MgCl2×6H2O МgSO4×7H2O Глюкоза |
20 г/л 5 г/л 0.584 г/л 0.186 г/л 2.03 г/л 2.463 г/л 3.6 г/л |
Также смотрите:
Сохранение озонового слоя
Определенное влияние на климат нашей планеты оказывает существование в стратосфере на высоте 25—30 км озонового слоя. Озон образуется в верхних слоях атмосферы при реакции молекулярного кислорода с атомарным, являясь продуктом диссоциации молекулярного кислорода под д ...
Специфичность реиннервации
Для полного восстановления функции после повреждения нервной системы регенерирующие аксоны должны восстановить связи со своими прежними мишенями. Классические эксперименты Лэнгли, подтвержденные позже исследованиями одиночных клеток, показали, что регенерирующие прега ...
Концепция энергизованной мембраны
Термин «энергизованная мембрана» трактуется обычно довольно широко, но в действительности он означает лишь, что поток ионов через бислой может использоваться для совершения работы. Чаще всего ионный поток создают протоны, и разность электрохимических потенциалов прото ...