Некоторые примеры использования аффинной хроматографии
Пример 1. Очистка фермента карбоксипептидазы А из мышцы крысы (Bodwell, Meyer, 1981).
На BrCN-активированную сефарозу 4В сажали белковый ингибитор карбоксипептидазы А, выделенный из картофеля. Фракцию гомогената мышцы, экстрагированную между 0,4М КС1 и 2М NaCI в нейтральном буфере, дополнительно очищали осаждением сульфатом аммония и сажали на аффинную колонку с ингибитором, уравновешенную тем же 2М NaCI в нейтральном буфере, затем промывали таким же раствором. Элюцию фермента вели тоже 2М NaCI, но в 0,01М Na2CO3 при рН 11,2.
Отрыв фермента от ингибитора происходил за счет сильного защелачивания элюента. Примесные белки выходили при промывке, а фермент элюировался острым пиком после смены буфера
Эффективность очистки на этом этапе можно оценить сопоставляя площади под двумя пиками, обозначенными пунктиром.
Также смотрите:
Как определили возрасты Солнца, звезд, Вселенной?
Каков диапазон временных интервалов во Вселенной?
Метод радиоактивного распада — важнейший метод определения больших временных диапазонов в последние полвека. Известно, что все живое получает двуокись углерода из воздуха. Некоторая часть углерода — радиоактивна, и любой образец вещества, приготовленный из живого, сод ...
Агротехника смородины чёрной
Смородину сажают весной и осенью, но лучший период посадки – осенний. За осеннее - зимний период почва хорошо оседает и уплотняется вокруг кустов. Растения весной рано начинают вегетацию и хорошо приживаются.
Для посадки используют качественные, чистосортные однолетн ...
Круговорот веществ и энергии в биосфере
Все живые организмы находятся во взаимосвязи с неживой природой и включаются в непрерывный круговорот веществ и энергии. В результате происходит биогенная миграция атомов. Необходимые для жизни организмов химические элементы переходят из внешней среды в организм. При ...