Некоторые примеры использования аффинной хроматографии

Биология » Использование аффинной хроматографии » Некоторые примеры использования аффинной хроматографии

Пример 1. Очистка фермента карбоксипептидазы А из мышцы крысы (Bodwell, Meyer, 1981).

На BrCN-активированную сефарозу 4В сажали белковый ингибитор карбоксипептидазы А, выделенный из картофеля. Фракцию гомогената мышцы, экстрагированную между 0,4М КС1 и 2М NaCI в нейтральном буфере, дополнительно очищали осаждением сульфатом аммония и сажали на аффинную колонку с ингибитором, уравновешенную тем же 2М NaCI в нейтральном буфере, затем промывали таким же раствором. Элюцию фермента вели тоже 2М NaCI, но в 0,01М Na2CO3 при рН 11,2.

Отрыв фермента от ингибитора происходил за счет сильного защелачивания элюента. Примесные белки выходили при промывке, а фермент элюировался острым пиком после смены буфера

Эффективность очистки на этом этапе можно оценить сопоставляя площади под двумя пиками, обозначенными пунктиром.


Также смотрите:

Строение белковых веществ.
Вопрос о строении белковых веществ впервые был поставлен А.Я.Данилевским в 1888 г. Он высказал предположение, что аминокислоты соединяются в белках по типу пептидов, т.е. за счёт своих аминных и карбоксильных групп. Данилевский считал, что белки состоят из полипепти ...

Закономерности самоорганизации
Как молодая, развивающаяся наука синергетика предложила новые методологические подходы к моделированию развития сложных систем. ...

Хвойные
Семейство Сосновые (Pinaceae) род Ель (Picea). Ель обыкновенная (Picea abies)-дерево до 30 м и более высотой и до 1 м в диаметре ствола. Кора в молодости буроватая, гладкая, с мелкими пленчатыми чешуйками, к старости становится чешуйчато-шероховатой. Побеги от коричн ...