Некоторые примеры использования аффинной хроматографии
Пример 1. Очистка фермента карбоксипептидазы А из мышцы крысы (Bodwell, Meyer, 1981).
На BrCN-активированную сефарозу 4В сажали белковый ингибитор карбоксипептидазы А, выделенный из картофеля. Фракцию гомогената мышцы, экстрагированную между 0,4М КС1 и 2М NaCI в нейтральном буфере, дополнительно очищали осаждением сульфатом аммония и сажали на аффинную колонку с ингибитором, уравновешенную тем же 2М NaCI в нейтральном буфере, затем промывали таким же раствором. Элюцию фермента вели тоже 2М NaCI, но в 0,01М Na2CO3 при рН 11,2.
Отрыв фермента от ингибитора происходил за счет сильного защелачивания элюента. Примесные белки выходили при промывке, а фермент элюировался острым пиком после смены буфера
Эффективность очистки на этом этапе можно оценить сопоставляя площади под двумя пиками, обозначенными пунктиром.
Также смотрите:
Дайте понятие внутренней энергии. Какие виды
внутренней энергии вы знаете? Как измеряется внутренняя энергия? В чем сущность
первого начала термодинамики?
Внутренняя энергия тела, складывается из кинетической энергии молекул тела и их структурных единиц (атомов, электронов, ядер), энергии взаимодействия атомов в молекулах и т. д. Во внутреннюю энергию не входит энергия движения тела как целого и потенциальная энергия, к ...
Список сокращений
АПФ – ангиотензинпревращающий фермент
ККС – калликреин-кининовая система
КПN – карбоксипептидаза N
ЛАП – лейцин-аминопептидаза
ММП – матриксные металлопротеазы
РААС – ренин-ангиотензин-альдостероновая система
РЩЖ – рак щитовидной железы
iNOS – индуцибельная NO- ...
G-белки: βγ-субъединицы
Фосфорилирование рецепторов является одним из механизмов регуляции их активности. βγ-субъединицы G-белков могут осуществлять отрицательную обратную связь, активируя протеинкиназы, которые фосфорилируют рецепторы. Эти протеинкиназы называются GRК. К GRК проте ...