Аффинная хроматография. Общая характеристика методаСтраница 2
Если в качестве лиганда выступает биополимер (белок или нуклеиновая кислота) и его участок биоспецифического взаимодействия оказывается достаточно удаленным от точки закрепления на матрице, проблема не возникает.
Однако если в качестве лиганда используется низкомолекулярный субстрат, кофермент или гормон, то близость его расположения к матрице может создавать стерические препятствия для правильной ориентации белка, взаимодействующего с таким лигандом.
В результате степень аффинного сродства вещества к обменнику может уменьшиться и даже упасть до нуля. В таких случаях необходимо биологически активный лиганд удалить от матрицы, вводя между ними тонкую "ножку", например, линейную цепочку метиленовых остатков ( . - СН2-СН2-СН2. .) или иную подходящую структуру, так называемого "спейсера""
Хотя принцип аффинной хроматографии очень прост, из приведенных кратких замечаний легко понять, что "конструирование" аффинного обменника для очистки нужного вещества является делом деликатным. Необходимо разумно выбрать матрицу, найти способ щадящего и, вместе с тем, надежного (как правило химического) закрепления на ней лиганда.
Если необходимо, то закрепления через спейсер, который тоже нужно выбрать наилучшим образом как в отношении его размера и степени гидрофильности, так и в отношении способов его связывания с матрицей и лигандом.
Разумеется, для многих частных, а также и общих случаев эта задача решена усилиями фирм, выпускающих аффинные сорбенты. Номенклатура их непрерывно расширяется и приводить ее здесь не имеет смысла.
Тем более, что каждый исследователь, понимающий исключительные возможности аффинной хроматографии, должен быть готов к тому, чтобы сконструировать аффинный обменник для решения своей особой задачи.
Также смотрите:
Формирование и извлечение градиентов. Природа градиентов
Для создания градиентов плотности растворов чаще всего применяются растворы сахарозы, иногда с фиксированным рН. В некоторых случаях хорошее разделение получается при использовании вместо обычной воды D20. В табл. 2.1 приведены свойства некоторых растворов сахарозы. ...
Стрелы времени
Понятие времени со временем изменяется. Абсолютного времени нет. Реальное, относительное время однонаправлено, оно идет только вперед. Как стрела. В науке анализируют три базовых «стрелы времени». Общеизвестна стрела термодинамическая. Она указывает направление времен ...
Фосфолипазы
Фосфолипазы - ферменты класса гидролаз, катализирующие катаболизм глицерофосфолипидов. Различают фосфолипазы секреторные, входящие в состав панкреатического сока, и клеточные фосфолипазы. Клеточные фосфолипазы А1, А2, D, С различаются по специфичности к отщепляемой гр ...