Измерение трансмембранного потенциала
Величину трансмембранного потенциала лучше всего измерять с помощью двух электродов, помещенных по разные стороны мембраны. Однако этот способ применим лишь для плоских модельных мембранных систем и некоторых крупных клеток. Обычно же приходится измерять потенциал на мембране либо протеоли-посом, либо клеток или органелл, например митохондрий или хло-ропластов. Для этих случаев разработано несколько методов.
1. Распределение ионов в соответствии с уравнением Нернста. В систему добавляют ион, способный проникать через мембрану, и он перераспределяется между внешней средой и внутренним объемом в соответствии с уравнением Нернста. На этом принципе основано использование в качестве молекулярных зондов таких гидрофобных ионов, как ТФФ+ или 86кЬ-валиномицин. Чтобы определить трансмембранный потенциал, нужно знать концентрацию иона внутри везикулы, органеллы или клетки, что нередко превращается в серьезную проблему. Ошибки в измерении Д* могут, в частности, возникнуть, если большие количества зонда связываются с мембранами клетки или если неправильно определен внутренний объем.
2. Спин-меченные ЭПР-зонды. Для этой цели используют несколько зондов — гидрофобных ионов, к которым ковалентно пришита парамагнитная нитроксильная группа. Концентрацию зонда, связанного с мембраной, легко определить из спектра ЭПР; при образовании на мембране потенциала зонд перераспределяется между фазами, и по изменению его концентрации в мембране можно оценить величину Д*. Изменение концентрации мембраносвязанного зонда обусловлено тем, что для внутривезику-лярного пространства отношение площади поверхности к объему гораздо больше, чем для внешнего раствора.
3. Оптические молекулярные зонды. Спектральные характеристики многих оптических зондов зависят от трансмембранного потенциала. Из наиболее распространенных назовем флуоресцентные производные мероцианина, оксонола и цианиновые красители. Все эти соединения связываются с мембраной, и, по-видимому, в основе их реакции на изменения трансмембранного потенциала может лежать несколько механизмов. Чаще всего взаимодействие электрического диполя, каким является зонд, с электрическим полем приводит к изменению ориентации диполя в бислое. В ряде случаев изменение степени агрегации зонда в бислое влечет за собой изменение квантового выхода флуоресценции. Большинство зондов применяют для определения трансмембранного потенциала, имеющего знак минус внутри везикулы, однако некоторые красители, например оксонолы, используются при обратной полярности потенциала.
К зондам другого типа, спектр поглощения которых чувствителен к трансмембранному потенциалу, относятся соединения стирольной природы, образующие в мембране конъюгированные структуры. Изменение их спектров поглощения при наложении потенциала обусловлено так называемым явлением электрохро-мизма. Переход молекулы зонда из основного состояния в возбужденное при поглощении кванта света сопровождается перераспределением электронов. На энергию электронного перехода влияет градиент потенциала, вектор которого параллелен направлению этого смещения заряда. Подобные электрохромные изменения спектра наблюдаются также для природных пигментов фотосинтетических мембран — каротиноидов. Преимущество зондов этого типа состоит в том, что соответствующие реакции происходят очень быстро и не зависят от степени агрегации или распределения зонда. Все эти свойства делают такие зонды особенно полезными для быстрых кинетических измерений.
Также смотрите:
Синергетика в современной науке
В последние годы наблюдается стремительный и бурный рост интереса к междисциплинарному направлению, получившему название "синергетика". Создателем синергетического направления и изобретателем термина "синергетика" является профессор Штутгартского у ...
Кивсяк
Кивсяк (Schizophyllum sabulosum L.) относится к отряду двупарноногих (Diplopoda) в классе многоножек (Myriapoda). Его можно найти с весны до поздней осени под камнями, под корой старых пней, в дуплах и прямо на стволах деревьев и кустарниках. Кивсяк нередко сваливаетс ...
Головня.
Головневые грибы — интересная во многих отношениях группа базидиомицетов. Известно около 1000 видов головневых грибов, объединенных в 40 родов. Головневые грибы поражают большинство органов своих растений-хозяев, в том числе вегетативные и цветочные почки, листья и с ...